熊玉红 刘阳 邓爱花孙 春枝 熊光初
【摘要】目的 对噬菌体生物扩增法检测痰标本中的结核分枝杆菌在涂阴肺结核诊断中的应用价值进行评价分析，为今后的临床及检验工作提供可靠的理论依据。方法 抽取在2009年1月~2013年12月间我院收治的临床确诊涂阴肺结核患者200例，对其痰液标本分别展开噬菌体生物扩增法和罗氏培养法进行结核分枝杆菌检测，并对检测结果进行对比分析。结果 经对比发现，噬菌体生物扩增法对结核分枝杆菌的检出率较罗氏培养法检出率显著升高（p＜0.05）。结论采取噬菌体生物扩增法检测痰标本中的结核分枝杆菌的临床价值显著，可使肺结核诊断率得到显著提高，降低误诊和漏诊发生率。
【关键词】噬菌体生物扩增法 结核分枝杆菌 涂阴肺结核 诊断 临床价值
【Abstract】ObjectiveBy phage amplification method to detect mycobacterium tuberculosis in sputum specimens in the diagnosis of smear-negative pulmonary tuberculosis to provide reliable theoretical basis for clinical and inspection work. Methods
The sputum samples of 200 cases of clinical diagnosis of smear-negative pulmonary tuberculosis patients from January 2009 December 2013 in our hospital were used to detect Mycobacterium tuberculosis by phage amplified biologically assay and the Roche culture method. Results
It suggests that a phage biological amplification method for detection of mycobacterium tuberculosis is more better than roche culture method （p< 0.05）. ConclusionThe clinical value of phage amplified biologically assay sputum Mycobacterium tuberculosis is remarkable， and the tuberculosis diagnosis rate has been significantly improved， which reduces the incidence of misdiagnosis and missed diagnosis and wo should pay attention.
【Key words】 Phage amplification method， Mycobacterium Tuberculosis， Smear-negative Tuberculosis，Diagnosis， Clinical Value
【Author′s address】Jiangxi Chest Hospital， Nanchang， Jiangxi， 330006， China
doi：10.3969/j.issn.1671-332X.2014.12.031
随着结核病全球回升，肺结核病已成为一个全球关注，关系到民族兴衰、经济发展和社会稳定的重大公共卫生问题。在诊断上传统的痰涂片抗酸染色法阳性率低只有20%~30%［1］，每毫升痰标本中结核分枝杆菌量小于1万条时普通抗酸染色法不易被检测出，培养又费时、且阳性率也不高，大多数肺结核病仅依靠临床诊断，易出现漏诊，使传染源不能早期发现，延误治疗时机，导致一方面未能及时的采取有效的控制传播措施，另一方面影响患者的肺功能和愈后，最终加重了患者、家庭及社会的经济负担。近期有研究显示［2］，噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌的临床价值显著。本次研究中出于对噬菌体生物扩增法检测痰标本中的结核分枝杆菌在涂阴肺结核诊断中的应用价值进行评价分析的目的，对200例涂阴肺结核患者展开了痰标本检测，并对检测结果进行了对比分析，现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料
研究中资料来源于我院收治的涂阴肺结核患者，抽取其中的200例作为研究对象，包括有男105例，女95例，年龄24~76岁，平均（43.6±11.9）岁，所有患者均符合临床《肺结核诊断和治疗指南》［3］中涂阴肺结核诊断标准，自愿接受临床研究，并签署了知情同意书。
1.2方法
1.2.1研究方法对以上统计的200例研究对象的痰标本分别采取噬菌体生物扩增法和罗氏培养法进行结核分枝杆菌检测，并对检测结果进行对比分析。
1.2.2标本采集本次研究中研究对象痰标本采集均为患者晨起后清水漱口后用力咳出的深部痰液，收集在已经消毒的塑料容器中，立即送检。
1.2.3检测方法①痰涂片抗酸染色法：采集脓样、干酪样痰液标本约0.05~10.1 ml，均匀涂抹为10 mm×20 mm卵圆形痰膜，将痰膜向上静置，自然干燥之后染色。所用抗酸染液由BASO公司制造，具体根据实际说明书展开操作。利用100倍油镜进行检查，淡蓝色背景下抗酸菌为红色，其他细胞为蓝色。②罗氏培养法：所有痰液标本在培养后均接受传统的生化法进行鉴定，若是鉴定证实为结核分枝杆菌则视为培养结果阳性，所有培养与鉴定操作菌严格遵照《结核病诊断实验室检验规程》［4］进行。③噬菌体生物扩增法：按照试剂盒具体操作步骤操作。结核分枝杆菌噬菌体裂解法检测试剂盒包括琼脂粉、培养粉、补充生长因子、杀毒剂、冻干噬菌体、冻干敏感细胞以及反应管等。其他试剂包括有：浓度为2.9%的枸橼酸钠溶液、浓度为4%的氢氧化钠溶液、0.067 M的磷酸盐缓冲溶液，pH值为6.8。
1.2.4结果判定
结果判定标准为［5］：存在0~19个菌斑视为检测结果阴性，存在20个或以上菌斑，甚至是全部融合者视为检测结果阳性。
1.3数据处理
相关数据采取spss 18.0统计学软件进行处理，计量资料采取均数加减标准差（±s）形式表示，对比中采取t检验，计数资料对比采取?2检验，p＜0.05时视为差异存在统计学意义。
2结果
2.1诊断率
经统计发现，200份痰标本经噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌阳性者127例，阳性率63.50%，罗氏培养法检测结核分支杆菌阳性者101例，阳性率为50.50%，显然噬菌体生物扩增法对结核分枝杆菌的检出率较罗氏培养法发生显著升高（p＜0.05）。
2.2两种检测方法检测结果比较
经统计发现，两种检测方法均阳性者96例，阳性率为48.00%，检测结果均为阴性者68例，阴性率为34.00%，两种检测手段检测结果总符合率为82.00%。
3讨论
根据2000年第四次全国结核病流行病学调查结果估算，我国目前有活动性肺结核患者450万，其中涂阳患者150万，而涂阴患者300万，占2/3，因此涂阴患者接触人数将远远超过涂阳患者的接触者，如不能及时的诊断和治疗，被传染的绝对人数有可能增多［6］。噬菌体生物扩增法检测肺结核患者痰标本具有较高的敏感性和特异性，同时简便、快速，全程只需48小时，加上本法检测的是活菌，因此可为活动性肺结核的诊断提供有力依据，这对早期发现传染源、积极治疗和采取有效的控制传播措施具有重要意义；同时为结核病的诊断提供一种新的实验室检测手段，且不需要特殊的仪器设备，不会对环境造成污染，便于推广运用［7］。
噬菌体生物扩增法（PhaB）检测原理是分枝杆菌噬菌体能感染活的分枝杆菌，未进入感染菌体内的噬菌体被随后加入的杀毒剂灭活，已进入菌体内的噬菌体不受影响。噬菌体在感染菌体内大量增殖，并将菌体裂解，释放的子代噬菌体可感染随后加入的指示细胞，并将其裂解，在琼脂平板上出现透亮的噬菌斑。因此，只要根据噬菌斑的情况即可判断待检标本的检测结果［8］。采用噬菌体生物扩增法检测临床痰标本中的结核分枝杆菌，只要痰标本中有少量的结核分枝杆菌（200~500条/ml）即可被检出［9］，此方法简便、快速，全程只需48小时。本研究旨在通过探讨噬菌体生物扩增法在快速并提高涂阴肺结核的诊断中的应用价值，探索一种肺结核早期快速的诊断方法，提高肺结核病的诊断率，减少误诊与漏诊，有利于肺结核的早发现、早诊断、早治疗，从而控制结核病的传播［10］。
本次研究中出于对噬菌体生物扩增法检测痰标本中的结核分枝杆菌在涂阴肺结核诊断中的应用价值进行评价分析的目的，对我院收治的200例涂阴肺结核患者痰标本分别采取噬菌体生物扩增法和罗氏培养法进行结核分枝杆菌检测，经对比发现，噬菌体生物扩增法检测结果阳性率为63.50%，罗氏培养法检测阳性率为50.50%，显然噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌的阳性率较罗氏培养法发生显著升高，两种方法的总符合率为82.00%，这一结果与相关文献报道结果一致，证实了噬菌体生物扩增法在涂阴肺结核患者痰标本结核分枝杆菌检测中的临床价值显著，可为临床诊断工作提供可靠的参考依据，值得关注。
综上所述，采用噬菌体生物扩增法检测临床痰标本中的结核分枝杆菌，只要痰标本中有少量的结核分枝杆菌（200~500条/ml）即可被检出，且方法快速、简便，可以提高肺结核病的诊断率，减少误诊与漏诊，最终节省了大量的医疗资源，具有较好的经济和社会效益。在今后的临床检验工作中应对其给予重视并积极推广，为临床肺结核的诊断、治疗方案的选择等工作提供可靠的参考依据，以达到改善临床疗效的效果。
［1］黄婉莹，方毅敏，陈志成，等.研究噬菌体裂解法对肺结核病的诊断应用价值［J］.重庆医学，2009（3）：332-333.
［2］高灵宝，沙阿云，田凤喜，等.痰结核菌噬菌体生物扩增法与抗酸染色法的相关性分析［J］.现代检验医学杂志，2008，23（1）：40-41.
［3］刘百歌，刘鹏，郑岚，等.噬菌体裂解法快速检测胸水中结核分枝杆菌的研究［J］.中国实验诊断学，2009，13（4）：533-534.
［4］万义福，熊国亮，张周云，等.噬菌体生物扩增法检测结核性胸膜炎患者胸水临床应用研究［J］.实验与临床医学，2009，27（1）：5-6.
［5］张会强，马永昌，席秀娥，等.噬菌体裂解法快速鉴定结核分枝杆菌的临床价值［J］.中国民康医学，2008，20（2）：84.
［6］边泽源，何川，涂少华，等.噬菌体法直接检测痰标本中结核分枝杆菌利福平耐药性的研究［J］.实验与检验医学，2009，14（2）：1109-1112.
［7］王庆，徐东芳.噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性研究［J］.中国防痨杂志，2011，24（1）：342-344.
［8］崔幸琨，田艳生，李红光，等.噬菌体生物扩增法快速检测临床标本中结核分枝杆菌及其耐药性［J］.检验医学，2010，26（1）：75.
［9］许卓卫，谭青云，罗少霞，等.涂阳肺结核患者密切接触者筛查模式探讨［J］.现代医院，2014，14（2）：150-151.
［10］温文沛，王云南，许庆敏.肺结核主要观察项目的临床诊断分析［J］.现代医院，2011，11（2）：12-14.
