廖秀清 梁亚统 马松梅 雷达
【摘要】目的 观察银杏达莫针剂对油酸所致急性肺损伤氧自由基的影响。方法
24只家兔随机分为3组：假手术组、油酸模型组及银杏达莫治疗组，每组8只。连续监测并记录造模前、造模和治疗后1、2、3、4 h的心率、平均动脉压的变化；实验结束时测定肺组织湿、干重量，计算湿/干重比，并取肺组织检测丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）。结果
银杏达莫组外周血管阻力降低；银杏达莫组与模型组比较，可以降低MDA（p<0.05）和升高SOD（p<0.05），减轻肺组织湿/干比（p<0.05）。结论银杏达莫针剂可减轻油酸所致急性肺损伤的氧化应激作用。
【关键词】油酸 急性肺损伤 氧自由基 银杏达莫针剂
基金项目：广东省中医药局建设中医药强省科研课题（编号：20112071）
【Abstract】Objective
To observe the effects of Ginkgo dipyridolum injection on oxygen free radicals in rabbits with acute lung injury （ALI） induced by oleic acid （OA）. Methods
24 rabbits were randomly divided into three groups： sham operation group， OA model group and ginkgo dipyridolum （GLE-DD） group in equal number.The changes of the heart rate and mean arterial pressure （MAP） before and after making model and at hours 1， 2， 3 and 4 after treatment were constantly monitored and recorded. At the end of the experiment， the wet weight and dry weight of the lung tissue was detected to count wet-to-dry （W/D） weight ratio. The MDA and SOD in the lung tissue were tested. Results
The peripheral vascular resistance was decreased in GLE-DD group. In comparison with the model group， the level of MDA was decreased （p<0.05） and the level of SOD was increased（p<0.05） in GLE-DD group. The W/D weight ratio of the lung tissue was reduced in GLE-DD group （p<0.05）. ConclusionGinkgo dipyridolum injection can alleviate the oxidative stress in OA-induced ALI.
【Key words】 Oleic acid， Acute lung injury， Oxygen free radicals， Ginkgo dipyridolum injection
【Author′s address】The Second People’s Hospital of Guangdong Province， Guangzhou 510317， Guangdong Province， China
doi：10.3969/j.issn.1671-332X.2014.09.008
急性肺损伤（Acute Lung Injury，ALI）是一种危及生命的疾病，其特征是肺组织的炎症发展迅速而严重，由于肺泡毛细血管壁的损伤、中性粒细胞浸润，导致肺泡内充满含丰富蛋白质的水肿液，引起肺顺应性差和低氧血症。其病死率极高，可达18.0％～54.7%［1］。中性粒细胞的活化和迁移到肺是发展成ALI的关键［2］。中性粒细胞的活化产生大量的炎症介质，氧自由基作为主要的炎症介质是造成肺损伤的重要因素。
银杏达莫为银杏叶提取物银杏总黄酮和双密达莫的复方针剂。研究发现， 银杏提取物具有多方面的生物效能，其中重要的药理功能即为抗氧化应激作用［3］，在ALI时可抑制氧应激，减少氧自由基损伤作用［4］。本研究采用油酸所致的家兔肺损伤模型，观察银杏达莫对急性肺损伤抗氧自由基的作用。
1材料与方法
1.1动物及材料新西兰大白兔24只，体重2.0～2.5 kg，雌雄各半，由南方医科大学动物实验中心提供。油酸（分析纯纯度>99.0）；银杏达莫注射液（贵州益佰制药有限公司，批号：H52020032，每支5 ml，主要成分银杏总黄酮4.5～5.5 mg，双嘧达莫1.8～2.2 mg）。丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒（南京建成生物公司）。
1.2方法
1.2.1动物处理腹腔注射3%戊巴比妥钠20 mg/kg，麻醉后将白兔仰卧于手术台，耳缘静脉置24 G留置针；分离右侧股骨动脉并置管，通过压力传感器连接多功能监护仪。
1.2.2动物分组随机分为3组，每组8只。假手术组：手术后经耳缘静脉注射0.9%生理盐水0.1 ml/kg，10 min后缓慢推注0.9%生理盐水30 ml；油酸肺损伤模型组：经耳缘静脉注射油酸0.1 ml/kg，10 min后缓慢推注0.9%生理盐水30 ml；银杏达莫治疗组：经耳缘静脉注射油酸0.1 ml/kg，10 min后缓慢推注银杏达莫注射液5 ml/kg+0.9%生理盐水，共30 ml。
1.3观察指标
1.3.1平均动脉压和心率多功能监护仪监测造模前和造模及治疗后1、2、3、4 h平均动脉压和心率。
1.3.2肺组织湿干比值（W／D）的测定实验结束处死家兔后，开胸取左上肺，滤纸吸干肺表面水分和血迹后称质量，然后将组织置于75℃电热恒温干燥箱中干燥，24 h后称其干质量，计算左肺W／D值。
1.3.3肺组织MDA和SOD测定实验结束取左上肺组织1 g，制成匀浆，将制备好的匀浆以3 500 r／rain离心15 min。取上清液0.1 ml，考马斯亮兰蛋白测定法检测肺组织匀浆液中蛋白浓度，按照试剂盒说明操作，测MDA和SOD含量。
1.4统计学分析采用spss 13.0软件包处理数据，计量数据采用均数±标准差（±s）表示，采用ANOVA单因素方差分析，组间比较采用q检验。
2结果
2.1一般情况
假手术组家兔实验前后无紫绀，呼吸频率无异常变化；油酸组家兔静脉注射油酸后均出现躁动，呼吸急促、紫绀，在整个实验过程中上述症状有逐渐加重的趋势；银杏达莫组有躁动，呼吸急促、紫绀的现象，但程度明显较油酸组减轻。
2.2平均动脉压与心率与假手术组比较，另2组平均动脉压无明显改变，但心率于2、3、4 h时点呈现下降，且油酸模型组更加明显（p<0.01）。银杏达莫组在各时点MAP均明显降低，与正常对照组和模型比较，有显著性差异（p<0.05）；提示银杏达莫针剂可降低体循环平均动脉压力，降低外周血管阻力。见表1、表2。
2.3肺组织湿干重比值（W/D）模型组W/D明显增加，提示肺水肿严重，与假手术组比较，有显著差异（p<0.01）。治疗组W/D与假手术组比较无显著差异（p>0.05），而与油酸模型组比较有显著差异（p<0.05），提示银杏达莫可抑制肺水肿形成。见表3。
2.4肺组织SOD和MDA
SOD在模型组与假手术组比较明显下降（p<0.05），经银杏达莫治疗后明显升高（p<0.05）；MDA在模型组与假手术组比较明显升高（p<0.01），经治疗后明显下降（p<0.05）。见表3。
3讨论
ALI的发病机制仍不完全清楚，且病理生理过程非常复杂。研究显示：活化的中性粒细胞（PMN）在肺组织内的浸润是发展成急性肺损伤的关键［2］。当油酸静脉注射后通过神经体液因素使肺微血管强烈收缩，同时其脂肪栓子阻塞肺毛细血管，使肺微循环障碍，油酸还可直接损伤血管内皮细胞和肺上皮细胞，当通透性发生改变后，富含蛋白质的液体及其他大分子物资涌入肺泡腔，引起肺水肿，破坏肺泡上皮屏障，中性粒细胞进入肺间质和支气管肺泡空间［2，5］。随着中性粒细胞的活化，一系列的炎症介质释放出来，氧自由基即为主要的炎症介质之一。活性氧（ROS）和氮（RNS）等分解成超氧阴离子和一氧化氮等物质。正常情况下，机体所产生的自由基可通过细胞内氧自由基清除酶予以清除，如肺细胞含有超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）等，可清除有害的自由基。然而当肺组织遭受物理、化学和毒素等损伤时，PMN分泌的大量炎症介质如自由基等造成了细胞氧化酶系统的损伤，不能灭活氧自由基，出现多种病理损伤，特别是脂质的损伤。脂质过氧化后，其终产物MDA水平上升，进一步引起蛋白质交联变性、DNA断裂，肺组织结构遭到破坏［4］。本研究中油酸损伤模型组，肺组织W/D比值明显增加，提示存在严重肺水肿，反应脂质过氧化的MDA明显增高和SOD明星下降，提示机体出现了氧化应激反应，氧自由基活跃，清除自由基的酶系统受到损伤。
近年来的研究提示，多种中药及其复方或中药提取物具有抗氧化功能，可以减轻重要器官急性损伤时的氧自由基作用，如川芎秦、葛根素、清开灵、参脉等可以减轻肺损伤时的氧自由基作用［6-7］；银杏提取物可减少急性肝损伤的过氧化反应［8］。银杏达莫针剂为银杏叶提取物银杏总黄酮和双密达莫的中西药复方制剂，两药组合具有加强和协同作用。本实验显示银杏达莫针剂能够降低油酸性肺损伤家兔的外周血管压力，减少肺组织W/D比值明显，即减轻肺水肿，并使MDA明显降低和SOD明显上升，部分抑制了氧化应激反应，提示对油酸性急性肺损伤有一定的保护作用。银杏达莫的作用机制，文献报告有抗氧化作用，能够清除氧自由基、过氧化氢和一氧化氮，增加抗氧化酶活性，从而改善细胞生存，减少自由基诱导的细胞凋亡，提高氧化应激能力［3，9］；通过抑制氧化应激和核因子kappa B（NF-κB）依赖性基质的金属蛋白酶-9通路而起作用。而NF-κB是一种调节基因表达的重要转录因子，已经被证明在ALI的形成中，可调节MMP-9的表达［4］。本研究结果提示，银杏达莫对油酸性急性肺损伤有一定的保护作用，其临床疗效如何有待进一步研究。
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