李文兵 王洛临 李智勇 张诚光 范宋玲
广东省第二中医院，广东广州510095
【摘要】目的：优选香元消痔巴布贴的最佳水提工艺。方法：采用正交试验法，以浸膏质量和小檗碱的含量为指标，对加水用量、提取时间、提取次数进行优选。结果：香元消痔巴布贴水提的最佳提取工艺为每次加10倍量水，提取2次，每次1.5h。结论：优选的水提取工艺方法可行、工艺稳定、重现性好。
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关键词 香元消痔巴布贴；提取工艺；小檗碱；正交试验
【中图分类号】R283.6【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2015）04-0017-03
基金项目：广东省中医药局立项资助科研课题（编号：20131117）。
作者简介：李文兵（1972-），广东湛江人，主任药师，主要从事医院药学研究。E-mail：liwenbing312@163.com
香元消痔巴布贴处方是广东省第二中医院的经验处方，由黄柏、地榆、元胡等八味中药材组成，具有清热解毒、散寒除湿、凉血止血的功效，主要用于湿热所致的内外痔、混合痔疮。黄柏为本方的君药。现代研究表明，黄柏中的生物碱为有效成分，试验选择小檗碱含量和水溶性固形物质量为评价指标，对影响提取效果的提取次数、加水量和提取时间进行优化，以确定其最佳提取工艺［1－3］。现报道如下。
1仪器与试药
1.1仪器安捷伦1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）； DHG9203A型电热鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；HWS26型电热恒温水浴锅（上海梅香仪器有限公司）；XS205DU型分析天平（瑞士梅特勒托利多）。
1.2试药小檗碱对照品（批号110713-200301，中国食品药品检定研究院）；黄柏、槐花、地榆、元胡等购于广州市药材公司，经广东省第二中医院李庆勇副主任中药师鉴定，均为《中华人民共和国药典》2010年版收载的正品；水为超纯水；甲醇为色谱纯；其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1正交试验因素水平的确定采用正交试验法，在预试验结果的基础上，以提取液中总浸膏得量和小檗碱的含量为评价指标，对影响提取工艺的主要因素有加水倍量、提取时间、提取次数进行优选，因素水平设计见表1。
2.2药材提取
2.2.1样品的制备按处方比例，称取药材共9份，按照L9（3）4正交表安排分别进行各实验提取，过滤，合并，提取液浓缩并定容至500ml，即得；分别测定固形物得量和小檗碱含量。
2.2.2阴性对照溶液制备按处方比例称取除黄柏外的其余药材，按“2.2.1”项下方法制备阴性样品溶液。
2.3总固形物得量的测定精密量取各正交试验样品25ml，置已知恒重的蒸发皿内，水浴蒸干，置105℃烘箱中，干燥3h，取出置干燥器中冷却0.5h，称重，计算总固体得量。计算公式：
2.4小檗碱的含量测定
2.4.1色谱条件色谱柱：Kromasil C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；柱温： 25℃；流动相：乙腈-0.1 %磷酸（50∶50）（每100ml流动相加入十二烷基硫酸钠0.1g）；流速：1ml/min；检测波长：265nm；进样量：10μl，理论塔板数以盐酸小檗碱计不低于4000。
2.4.2对照品溶液的制备精密称取小檗碱对照品适量，置50 ml棕色量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含1.005mg小檗碱的对照品溶液。
2.4.3供试品溶液的制备分别精密吸取正交试验所得各样品溶液2ml，置25ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液。
2.4.4系统性试验按“2.4.1”项下色谱条件，分别取上述对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10μl进样，进行系统性试验，结果见图1-3，小檗碱分离度良好，阴性无干扰，理论塔板数按小檗碱峰计算不低于4000。
2.4.5线性关系考察精密取上述对照品溶液2、5、10、15、20 μl注入高级液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积对数为纵坐标，进样量为横坐标进行线性回归，得回归方程为Y=2.53X-33.44，r=0.9998，结果表明，小檗碱在浓度范围2.01～20.1μg内线性关系良好。
2.4.6精密度试验精密吸取上述对照品溶液10μl，重复进样6次，按“2.4.1”项下色谱条件测定。结果小檗碱峰面积的RSD为1.26%，表明仪器精密度良好。
2.4.7稳定性试验取同一份样品，分别于0、1、2、4、8、12h，进样10μl，按“2.4.1”项下色谱条件测定。结果小檗碱峰面积积分值RSD为1.58%，表明供试品溶液在12h内稳定性良好。
2.4.8重复性试验取同一批样品5份，按“2.4.3”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定峰面积并计算含量。结果测得小檗碱平均含量的RSD为0.55%，表明该方法重复性良好。
2.4.9加样回收率试验精密吸取已知含量的样品6份，分别精密加入小檗碱对照品1.005 mg，按2.4.1项下方法测定，计算加样回收率，结果小檗碱平均回收率为98.86%，RSD为1.76%，表明此方法可行。
2.5数据处理与工艺优选用综合加权评分法，总固形物量和小檗碱含量9次试验的最大值为100分，将各指标成分的总量分别转换为评分值，总固体得率的加权系数为0.4，小檗碱含量的加权系数为0.6，将每次试验的各指标成分的评分值乘以相应的加权系数后求和，得综合评分值，以综合评分值计算正交试验结果，并进行方差分析，结果见表2、3。
结果表明，由直观分析可知因素主次为提取次数（A）>提取时间（C）>水用量（B）。方差分析表明，三个因素对试验结果均有显著的影响，确定最佳提取工艺为：每次分别加10倍量水，提取1.5K，回流提取2次，即A2B2C3。
2.6最佳工艺验证按正交试验结果的最佳工艺验证试验3次，结果见表4。
验证试验结果表明，三个平行试验的综合评分结果与正交试验结果之间差异不大，提示所优选的提取工艺条件基本稳定。
3讨论
本文选择将香元消痔巴布贴中黄柏、槐花、地榆、元胡等水提取进行工艺研究，根据各药材化学成份性质分析，黄柏中的主要有效成分盐酸小檗碱为季铵盐易溶于水，课题组经过多次试验显示，盐酸小檗碱转移率较高，最后确定以提取液中总固形物含量和小檗碱的含量为评价指标，对提取工艺进行优选，最佳提取工艺为：每次分别加10倍量水，提取1.5h，回流提取2次，即A2B2C3。
通过验证该提取工艺，用高效液相色谱法测定小檗碱的含量，数据准确、方法简便、重复性好，能有效地控制该制剂的质量，而且该工艺生产成本低、生产工艺稳定、有效成分提取率高，适合于医院制剂小规模的生产。
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参考文献
［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［M］．北京：中国医药科技出版社，2010： 286-287．
［2］杨明艳，马相锋，李洪玉，等．正交设计法优选消癖健乳巴布膏水提工艺［J］．现代医院，2012，12（1）：60-62．
［3］尹华，章建华，许丛辉，等．三黄散瘀巴布剂中黄柏的提取工艺研究［J］．中华中医药学刊，2011，29（2）：235-237．
（收稿日期：2014.11.19）
